Place des intégrons dans la dissémination de la résistance aux antibiotiques en clinique et dans l’environnement
Sylvain MEYER, Olivier BARRAUD
UMR INSERM 1092 : Anti-infectieux, supports moléculaires des résistances et innovations thérapeutiques
Faculté de Médecine, Université de Limoges
Service de Bactériologie-Virologie-Hygiène, CHU de Limoges
sylvain.meyer@unilim.fr ; olivier.barraud@unilim.fr
Définition et structure d’un intégron
Les intégrons de résistance ou intégrons mobiles, dénommés par la suite « intégrons », sont des éléments génétiques capables de promouvoir l’acquisition et l’expression de gènes de résistance aux antibiotiques et aux antiseptiques (1). Immobiles par eux-mêmes mais localisés sur des éléments génétiques mobiles tels que les transposons ou les plasmides, ils jouent un rôle clé dans la dissémination de l’antibiorésistance, notamment chez les bactéries à Gram négatif, aussi bien en clinique que dans l’environnement.
Structurellement, la plateforme fonctionnelle d’un intégron est composée de 3 éléments essentiels à savoir :
- Un gène intI qui code pour une intégrase IntI, et dont la séquence en acides aminés permet de déterminer la classe de l’intégron (2). Sont ainsi distingués les intégrons de classe 1, 2 et 3.
- Un site de recombinaison attI reconnu par l’intégrase (3).
- Un promoteur Pc, dont il existe plusieurs variants, localisé dans la séquence codante de l’intégrase et qui assure l’expression des gènes de cassettes intégrées en aval.
Figure 1 : Structure de base d’un intégron
La plateforme fonctionnelle d’un intégron contient 3 éléments clés : un gène intI qui code une intégrase, un site spécifique de recombinaison attI et un promoteur Pc. Le réseau de cassettes localisé en aval correspond à la partie variable de l’intégron à l’origine de l’expression de l’antibiorésistance. Pc = promoteur de cassettes ; C1, C2 : cassettes hébergeant un gène (généralement un gène de résistance aux antibiotiques) ; attI, attC1, attC2 : sites spécifiques de recombinaison reconnus par l’intégrase ; intI : gène de l’intégrase. (4)
En aval de cette plateforme, l’intégron peut héberger un nombre variable de cassettes (0 à 10), une cassette étant l’association d’un gène (codant notamment des résistances à des antibiotiques) et d’un site attC reconnu par l’intégrase. Les cassettes sont des unités génétiques mobiles qui peuvent facilement être intégrées ou excisées via l’intégrase IntI par un mécanisme de recombinaison spécifique de site grâce à des recombinaisons entre 2 sites attC ou entre le site attI et un site attC. Les cassettes ne possédant pas de promoteur propre, la distance séparant la cassette du promoteur Pc conditionne le niveau d’expression du gène qu’elle renferme. Ce système permet donc le stockage de cassettes éloignées, ayant des gènes peu exprimés, qui pourront être mieux exprimés après recombinaison des cassettes via l’intégrase IntI et rapprochement de celles-ci de Pc, notamment lors d’une exposition aux antibiotiques (5). Les réarrangements liés à l’intégrase peuvent ainsi mener à l’apparition de résistances qui étaient jusque-là portées mais non exprimées.
Les intégrons de classe 1 sont les plus prévalents (mais aussi les plus étudiés) et ils possèdent une grande variabilité de cassettes (6). Les intégrons de classe 2 sont eux plus stables du fait de la présence fréquente d’une intégrase non fonctionnelle (7). Enfin, les intégrons de classe 3 ont été plus rarement décrits mais constituent un réservoir environnemental important (8). Des milliers de cassettes différentes ont été décrites (9) dont des centaines impliquées dans la résistance aux antibiotiques. La résistance aux β-lactamines est fréquemment retrouvée dans les intégrons (pénicillinases, oxacillinases, BLSE voire carbapénémase) tout comme la résistance au triméthoprime, aux aminosides ou au chloramphénicol.
Place des intégrons comme marqueurs de la résistance aux antibiotiques en clinique
Les intégrons sont couramment retrouvés au sein des bacilles à Gram négatif (BGN) isolés chez l’Homme tels que Escherichia coli, Klebsiella spp, Enterobacter spp et autres entérobactérales, Pseudomonas aeruginosa ou encore Acinetobacter baumannii (10). L’augmentation de la résistance de ces BGN est particulièrement préoccupante à l’hôpital et en particulier dans les services de réanimation où les sepsis et pneumopathies acquises sous ventilation mécanique sont fréquentes. Une étude grecque a d’ailleurs démontré qu’un séjour en unité de soins intensifs, une longue durée d’hospitalisation ou l’administration antérieure d’une antibiothérapie par cotrimoxazole, pénicillines +/- inhibiteurs de β-lactamases, aminosides ou quinolones augmentaient le risque de portage d’intégrons (11). Il a été retrouvé qu’environ 10 à 30% des BGN isolés d’hémocultures sont porteurs d’intégrons (12)(13). Comme le montre la Figure 2, la présence des intégrons est corrélée à une multi-résistance chez les entérobactérales (14) et constitue un bon marqueur de l’acquisition de résistance avec une bonne valeur prédictive négative (13). Ceci a été particulièrement mis en évidence pour certains antibiotiques comme les aminosides, le cotrimoxazole, la ciprofloxacine ou les C3G. La recherche d’intégrons directement à partir des prélèvements cliniques par qPCR permettrait ainsi de mieux ajuster l’antibiothérapie probabiliste et de mieux préserver l’utilisation des antibiotiques à large spectre.
Figure 2 : Lien entre présence d’intégrons et nombre de résistances chez les entérobactérales.
D’après l’étude de Barraud O. et al (13).
intI+ : présence du gène de l’intégrase, intI- : absence du gène de l’intégrase
D’autres entérobactérales comme Proteus, Morganella ou Providencia ont la particularité d’héberger plutôt des intégrons de classe 2 avec un réseau de cassettes relativement stable, pouvant constituer un réservoir (15). Mendes Moreira et al ont montré qu’environ 40% des Proteae isolés en clinique en sont porteurs et que la présence d’intégrons de classe 2 est corrélée à un phénotype de multirésistance, là encore concernant les aminosides, le cotrimoxazole ou les fluoroquinolones.
Chez les bactéries à Gram positif (BGP), les intégrons sont beaucoup plus rarement retrouvés. Quelques publications ont mis en évidence des souches de corynébactéries porteuses d’intégrons de classe 1 (16) comme cela a été décrit chez Corynebacterium diphtheriae avec un intégron impliqué dans la résistance au cotrimoxazole (17). Néanmoins, la prévalence des intégrons chez les BGP étant confidentielle, il n’est pas possible d’utiliser les intégrons chez les BGP comme des marqueurs de résistance.
Place des intégrons comme marqueurs de la résistance aux antibiotiques dans l’environnement
Les eaux usées sont une source majeure de dissémination de la résistance aux antibiotiques dans l’environnement (18). Le biofilm est un milieu particulièrement favorable à l’acquisition et aux échanges de gènes de résistance pour les bactéries (19). Plus de 60% des gènes de résistance retrouvés dans les effluents sont portés par des éléments génétiques mobiles (20) et il est estimé qu’entre 1 et 5% des bactéries retrouvées dans le sol ou l’eau sont porteuses d’intégrons (21). Les usages des antibiotiques dans les fermes d’élevages sont aujourd’hui encore de grands pourvoyeurs de dissémination de l’antibiorésistance dans l’environnement (22). Il est d’ailleurs estimé que 30 à 90% des antibiotiques ingérés sont naturellement excrétés et retrouvés dans les effluents (23), ce qui favorise une plus forte pression de sélection antibiotique environnementale, et donc une plus importante détection des intégrons. En effet, plusieurs études in vitro ont démontré que des concentrations subinhibitrices en antibiotiques pouvaient influencer le comportement bactérien et influencer leurs modifications génétiques (24).
Par ailleurs, il a été démontré que le microbiote digestif est un réservoir important de gènes de résistance aux antibiotiques (25) et que la pollution fécale humaine et animale est corrélée à la dissémination de la résistance par les effluents (26). On peut ainsi distinguer par leur quantité et leur profil en gènes de résistance aux antibiotiques les effluents urbains des effluents hospitaliers. Une étude a ainsi démontré que bien que les effluents hospitaliers ne représentent que 2% du flux des effluents totaux qui arrivent en station d’épuration, ils contribuent à hauteur de 14% de la masse en intégrons de classe 1 détectés (18) (Figure 3). Ils présentent également un profil de résistance différent du reste des effluents, imputable à une plus grande consommation d’antibiotiques à l’hôpital (27)(28). Plusieurs études ont d’ailleurs relevé dans les effluents hospitaliers une plus grande quantité d’entérobactérales porteuses de gènes de résistance dont les BLSE (29)(30).
Figure 3 : Principales voies d’entrée des intégrons dans l’environnement, basées sur la proportion d’intégrons dans les communautés bactériennes (abondances relatives).
Les flèches représentent en bleu : les flux d’eau, en marron : les flux de solide, en gris : le cheminement des animaux vers les abattoirs, en pointillées noirs : les consommations d’antibiotiques, et en noir : les effluents non étudiés. Les croix représentent des abondances relatives : + + + ≥ 0,3 et pouvant aller jusqu’à 5 ; 0,3 ≥ + + ≥ 0,03 ; + < 0,1.
Tous ces arguments tendent à démontrer que les intégrons de classe 1 sont considérés aujourd’hui comme des marqueurs de pollution anthropique. Plusieurs études soutiennent ce postulat (31)(32). Ainsi, les intégrons sont particulièrement présents dans l’environnement, ce qui permet aux bactéries hôtes de toujours mieux répondre à la pression de sélection aux antibiotiques, antiseptiques et métaux lourds exercés par l’Homme sur son environnement. Les intégrons sont donc un exemple concret de l’interaction complexe qu’entretiennent les Hommes avec le monde animal et l’environnement en terme d’antibiorésistance (concept OneHealth). (33)(34)
Bibliographie :
- Stokes HW, Hall RM. A novel family of potentially mobile DNA elements encoding site-specific gene-integration functions: integrons. Mol Microbiol. déc 1989;3(12):1669‑83.
- Mazel D. Integrons: agents of bacterial evolution. Nat Rev Microbiol. août 2006;4(8):608‑20.
- Partridge SR, Recchia GD, Scaramuzzi C, Collis CM, Stokes HW, Hall RM. Definition of the attI1 site of class 1 integrons. Microbiol Read Engl. nov 2000;146 ( Pt 11):2855‑64.
- Barraud O, Ploy M-C. Actualités sur les intégrons de résistance aux antibiotiques : mise au point. J Anti-Infect. sept 2011;13(3):133‑44.
- Barraud O, Ploy M-C. Diversity of Class 1 Integron Gene Cassette Rearrangements Selected under Antibiotic Pressure. J Bacteriol. juill 2015;197(13):2171‑8.
- Partridge SR, Tsafnat G, Coiera E, Iredell JR. Gene cassettes and cassette arrays in mobile resistance integrons. FEMS Microbiol Rev. juill 2009;33(4):757‑84.
- Hansson K, Sundström L, Pelletier A, Roy PH. IntI2 Integron Integrase in Tn7. J Bacteriol. 15 mars 2002;184(6):1712‑21.
- Moura A, Henriques I, Smalla K, Correia A. Wastewater bacterial communities bring together broad-host range plasmids, integrons and a wide diversity of uncharacterized gene cassettes. Res Microbiol. févr 2010;161(1):58‑66.
- Moura A, Soares M, Pereira C, Leitão N, Henriques I, Correia A. INTEGRALL: a database and search engine for integrons, integrases and gene cassettes. Bioinforma Oxf Engl. 15 avr 2009;25(8):1096‑8.
- Kaushik M, Kumar S, Kapoor RK, Virdi JS, Gulati P. Integrons in Enterobacteriaceae: diversity, distribution and epidemiology. Int J Antimicrob Agents. févr 2018;51(2):167‑76.
- Daikos GL, Kosmidis C, Tassios PT, Petrikkos G, Vasilakopoulou A, Psychogiou M, et al. Enterobacteriaceae bloodstream infections: presence of integrons, risk factors, and outcome. Antimicrob Agents Chemother. juill 2007;51(7):2366‑72.
- Heir E, Lindstedt B-A, Leegaard TM, Gjernes E, Kapperud G. Prevalence and characterization of integrons in blood culture Enterobacteriaceae and gastrointestinal Escherichia coli in Norway and reporting of a novel class 1 integron-located lincosamide resistance gene. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 8 juill 2004;3:12.
- Barraud O, François B, Chainier D, Vignaud J, Ploy M-C. Value of integron detection for predicting antibiotic resistance in patients with Gram-negative septicaemia. Int J Antimicrob Agents. oct 2014;44(4):351‑3.
- Leverstein-van Hall MA, M Blok HE, T Donders AR, Paauw A, Fluit AC, Verhoef J. Multidrug resistance among Enterobacteriaceae is strongly associated with the presence of integrons and is independent of species or isolate origin. J Infect Dis. 15 janv 2003;187(2):251‑9.
- Mendes Moreira A, Couvé-Deacon E, Bousquet P, Chainier D, Jové T, Ploy M-C, et al. Proteae: a reservoir of class 2 integrons? J Antimicrob Chemother. 01 2019;74(6):1560‑2.
- Nandi S, Maurer JJ, Hofacre C, Summers AO. Gram-positive bacteria are a major reservoir of Class 1 antibiotic resistance integrons in poultry litter. Proc Natl Acad Sci U S A. 4 mai 2004;101(18):7118‑22.
- Barraud O, Badell E, Denis F, Guiso N, Ploy M-C. Antimicrobial drug resistance in Corynebacterium diphtheriae mitis. Emerg Infect Dis. nov 2011;17(11):2078‑80.
- Stalder T, Barraud O, Jové T, Casellas M, Gaschet M, Dagot C, et al. Quantitative and qualitative impact of hospital effluent on dissemination of the integron pool. ISME J. avr 2014;8(4):768‑77.
- Strugeon E, Tilloy V, Ploy M-C, Da Re S. The Stringent Response Promotes Antibiotic Resistance Dissemination by Regulating Integron Integrase Expression in Biofilms. mBio. 16 2016;7(4).
- Buelow E, Rico A, Gaschet M, Lourenço J, Kennedy SP, Wiest L, et al. Hospital discharges in urban sanitation systems: Long-term monitoring of wastewater resistome and microbiota in relationship to their eco-exposome. Water Res X. 1 mai 2020;7:100045.
- Gillings MR. Integrons: Past, Present, and Future. Microbiol Mol Biol Rev MMBR. juin 2014;78(2):257‑77.
- Barlow RS, Fegan N, Gobius KS. Integron-containing bacteria in faeces of cattle from different production systems at slaughter. J Appl Microbiol. août 2009;107(2):540‑5.
- Sarmah AK, Meyer MT, Boxall ABA. A global perspective on the use, sales, exposure pathways, occurrence, fate and effects of veterinary antibiotics (VAs) in the environment. Chemosphere. oct 2006;65(5):725‑59.
- Rodríguez-Rojas A, Rodríguez-Beltrán J, Couce A, Blázquez J. Antibiotics and antibiotic resistance: a bitter fight against evolution. Int J Med Microbiol IJMM. août 2013;303(6‑7):293‑7.
- Sommer MOA, Church GM, Dantas G. The human microbiome harbors a diverse reservoir of antibiotic resistance genes. Virulence. août 2010;1(4):299‑303.
- Karkman A, Pärnänen K, Larsson DGJ. Fecal pollution can explain antibiotic resistance gene abundances in anthropogenically impacted environments. Nat Commun. 08 2019;10(1):80.
- Buelow E, Bayjanov JR, Majoor E, Willems RJ, Bonten MJ, Schmitt H, et al. Limited influence of hospital wastewater on the microbiome and resistome of wastewater in a community sewerage system. FEMS Microbiol Ecol. 01 2018;94(7).
- Wang Q, Wang P, Yang Q. Occurrence and diversity of antibiotic resistance in untreated hospital wastewater. Sci Total Environ. 15 avr 2018;621:990‑9.
- Chagas TPG, Alves RM, Vallim DC, Seki LM, Campos LC, Asensi MD. Diversity of genotypes in CTX-M-producing Klebsiella pneumoniae isolated in different hospitals in Brazil. Braz J Infect Dis Off Publ Braz Soc Infect Dis. oct 2011;15(5):420‑5.
- Korzeniewska E, Korzeniewska A, Harnisz M. Antibiotic resistant Escherichia coli in hospital and municipal sewage and their emission to the environment. Ecotoxicol Environ Saf. mai 2013;91:96‑102.
- Gillings MR, Gaze WH, Pruden A, Smalla K, Tiedje JM, Zhu Y-G. Using the class 1 integron-integrase gene as a proxy for anthropogenic pollution. ISME J. juin 2015;9(6):1269‑79.
- Amos GCA, Gozzard E, Carter CE, Mead A, Bowes MJ, Hawkey PM, et al. Validated predictive modelling of the environmental resistome. ISME J. juin 2015;9(6):1467‑76.
- Sikkema R, Koopmans M. One Health training and research activities in Western Europe. Infect Ecol Epidemiol. 2016;6:33703.
- Chainier D, Barraud O, Masson G, Couve-Deacon E, François B, Couquet C-Y, et al. Integron Digestive Carriage in Human and Cattle: A « One Health » Cultivation-Independent Approach. Front Microbiol. 2017;8:1891.
Bernard Lowder
great article
SOLanedah
Cialis Diario
I am sorry, that I interfere, but, in my opinion, this theme is not so actual.
Cialis 5 mg prezzo cialis 5 mg prezzo tadalafil 5 mg prezzo
SDichaelsop
Aviator Spribe играть на доллары
I apologise, but, in my opinion, you commit an error. Let’s discuss.
Получайте крупные выигрыши с автоматом Aviator Spribe играть с друзьями онлайн казино в нашем казино!
Cqkaew
lipitor 10mg usa lipitor 20mg brand lipitor 20mg oral
Lzmpcd
finpecia cheap buy diflucan 100mg sale order diflucan without prescription
Ismaelagopy
What’s up, every time i used to check weblog posts here early in the break of day, for the reason that i enjoy to gain knowledge of more and more.
http://maps.google.com.qa/url?q=https://didvirtualnumbers.com/de/
Fzsgjr
buy cheap generic baycip – myambutol 1000mg canada buy augmentin 375mg pill
TimsothyTet
Absolutely with you it agree. In it something is also to me your idea is pleasant. I suggest to take out for the general discussion.
virtueel telefoonnummer voor altijd
Pdnufd
stromectol order – buy cefuroxime 250mg buy sumycin 500mg generic
Hcrerx
ivermectin 6 mg tablets for humans – buy cefixime 200mg sumycin usa
Ismaelagopy
Авиатор Спраб
Добро пожаловать в захватывающий мир авиаторов! Aviator – это увлекательная игра, которая позволит вам окунуться в атмосферу боевых действий на небе. Необычные графика и захватывающий сюжет сделают ваше путешествие по воздуху неповторимым.
Aviator Spribe скачать казино
GichardCrorp
Aviator Spribe играть
Добро пожаловать в захватывающий мир авиаторов! Aviator – это увлекательная игра, которая позволит вам окунуться в атмосферу боевых действий на небе. Необычные графика и захватывающий сюжет сделают ваше путешествие по воздуху неповторимым.
Aviator Spribe казино играть на тенге
Rzfbzd
purchase ampicillin online cheap monodox for sale online buy generic amoxil
shrooms in denver
Hmm it appears like your blog ate my first comment
(it was super long) so I guess I’ll just sum it up what I submitted
and say, I’m thoroughly enjoying your blog.
I as well am an aspiring blog blogger but I’m still new
to the whole thing. Do you have any tips for inexperienced blog writers?
I’d really appreciate it.
amanita muscaria effects
Hi, this weekend is good designed for me, for the reason that this point in time i am reading this great educational article here at my
home.
Stephentet
Hi there it’s me, I am also visiting this site regularly, this website is truly good and the visitors are actually sharing good thoughts.
Frequency Shifter VST Plugins
Bnsmtz
buy glucophage 500mg generic – order duricef 250mg online cheap lincocin 500mg cheap
Dichaelsop
Hey I know this is off topic but I was wondering if you knew of any widgets I could add to my blog that automatically tweet my newest twitter updates. I’ve been looking for a plug-in like this for quite some time and was hoping maybe you would have some experience with something like this. Please let me know if you run into anything. I truly enjoy reading your blog and I look forward to your new updates.
writing service
JamesVah
В ассортименте нашего интернет-магазина сантехники представлена только оригинальная продукция таких известных брендов как Джилекс, PRO AQUA, Valfex, LD, СТМ и многих других
Hzbugk
oral clozapine 100mg – frumil over the counter order famotidine 20mg generic
BillySnast
Электронная регистрация в Росреестре – Сделки онлайн – Центр “Недвижимость и право”
Электронная регистрация в Росреестре сделок с недвижимостью. Ускоренные сроки – 3-7 дней. Выписки из ЕГРН.
Thomaskem
Аренда квартир посуточно посуточно и на длительный срок, любого типа и комфорта в Крыму и г. Симферополь
Rwttvq
buy quetiapine paypal – buy sertraline 50mg pill eskalith online order
Hmhgbv
clomipramine 50mg over the counter – purchase remeron generic purchase doxepin online
Lhanedah
Российская компания продает разборные гантели https://gantel-razbornaya.ru/ – у нас найдете объемный ассортимент вариантов. Комфортные снаряды дают продуктивно выполнять силовые занятия в любом месте. Спортивные снаряды отличаются качеством, безопасностью в эксплуатации. Компания из России продуктивно развивает и совершенствует инновационные идеи, чтобы осуществить спортивные цели постоянных покупателей. В изготовлении долговечных отягощений реализуются лучшие марки металла. Значительный комплект вариантов дает возможность приобрести наборные отягощения для продуктивной программы тренировок. Для домашних тренировок – это лучший набор с компактными размерами и лучшей фунциональности.
Lhanedah
Создаваемые российской компанией тренажеры для кинезитерапии trenazhery-dlya-kineziterapii.ru и специально разработаны для восстановления после травм. Устройства имеют оптимальное предложение стоимости и качества.
Продаем очень недорого Кроссовер с перекрестной тягой с облегченной конструкцией. В ассортименте для кинезитерапии всегда в продаже варианты грузоблочного и нагружаемого типа.
Изготавливаемые тренажеры для реабилитации гарантируют комфортную и безопасную тренировку, что особенно важно для тренирующихся пациентов в процессе восстановления.
Станки обладают изменяемым сопротивлением и уровнями нагрузки, что позволяет индивидуализировать занятия в соответствии с потребностями каждого больного.
Все тренажеры подходят для кинезитерапии по руководству профессора Сергея Бубновского. Оборудованы рукоятками для комфортного осуществления тяг сидя или лежа.
Ismaelagopy
Thanks for sharing your info. I truly appreciate your efforts and I am waiting for your next write ups thank you once again.
арендовать номер телефона
Dichaelsop
Exceptional post however I was wondering if you could write a litte more on this subject? I’d be very grateful if you could elaborate a little bit more. Cheers!
Официальный сайт Gama casino
Ihlhfz
clavulanate cost – bactrim 960mg without prescription generic cipro 1000mg
Shanedah
Hi to all, it’s truly a fastidious for me to visit this site, it contains valuable Information.
Гама казино
Zobacz jak
Excellent write-up
Fobertvence
It’s amazing for me to have a web site, which is helpful for my know-how. thanks admin
https://www.xn--jj0bn3viuefqbv6k.com/bbs/board.php?bo_table=free&wr_id=1612290
Yrjvcg
order azithromycin 500mg pills – purchase metronidazole generic ciprofloxacin where to buy
JseraldErece
Здравствуйте!
Бывало ли у вас такое, что приходилось писать дипломную работу в крайне сжатые сроки? Это действительно требует огромной ответственности и напряженных усилий, но важно не опускать руки и продолжать активно заниматься учебными процессами, как я.
Для тех, кто умеет быстро находить и анализировать информацию в сети, это действительно помогает в процессе согласования и написания дипломной работы. Больше не нужно тратить время на посещение библиотек или устраивать встречи с дипломным руководителем. Здесь, на этом ресурсе, предоставлены надежные данные для заказа и написания дипломных и курсовых работ с гарантией качества и доставкой по всей России. Можете ознакомиться с предложениями на сайте , это проверено!
https://landik-diploms-srednee24.com/
купить диплом университета
купить диплом в Москве
купить диплом о среднем специальном
купить аттестат школы
купить диплом Вуза
Желаю всем положительных оценок!
Wvncxu
ivermectin 12 mg over counter – buy cefaclor online buy cefaclor without prescription
Mzjili
buy depo-medrol medication – buy fml-forte sale astelin 10ml sprayers
Earnestordip
Привет всем!
Приобретите диплом Гознака у нас по специальной цене с доставкой в любой регион России без предоплаты.
http://saksx-attestats.ru/
Купите диплом ВУЗа с гарантированной доставкой в любой город России без предварительной оплаты и уверенностью в его легальности!
Закажите диплом ВУЗа без предоплаты и получите его с доставкой в руки по всей России – это просто и удобно!
sSdfffobtix
Здравствуйте!
Бывало ли у вас такое, что приходилось писать дипломную работу в крайне сжатые сроки? Это действительно требует огромной ответственности и напряженных усилий, но важно не опускать руки и продолжать активно заниматься учебными процессами, как я.
Для тех, кто умеет быстро находить и анализировать информацию в сети, это действительно помогает в процессе согласования и написания дипломной работы. Больше не нужно тратить время на посещение библиотек или устраивать встречи с дипломным руководителем. Здесь, на этом ресурсе, предоставлены надежные данные для заказа и написания дипломных и курсовых работ с гарантией качества и доставкой по всей России. Можете ознакомиться с предложениями на сайте , это проверено!
http://naturetour.ru/club/log/
купить диплом института
купить диплом о высшем образовании
купить диплом магистра
купить диплом Гознак
купить аттестат
Желаю любому нужных оценок!
sSdfffobtix
Доброго всем дня!
Бывали ли у вас случаи, когда приходилось писать дипломную работу в крайне сжатые сроки? Это действительно требует большой ответственности и напряженного труда, но важно не унывать и продолжать активно участвовать в учебном процессе, как я и делаю.
Для тех, кто умеет эффективно находить и использовать информацию в интернете, это может существенно облегчить процесс согласования и написания дипломной работы. Больше не нужно тратить время на посещение библиотек или организацию встреч с научным руководителем. Здесь, на этом ресурсе, предоставлены надежные данные для заказа и написания дипломных и курсовых работ с гарантией качества и доставкой по всей России. Можете ознакомиться с предложениями на , это проверено!
http://aviapoisk.getbb.ru/viewtopic.php?f=27&t=610
купить диплом специалиста
купить диплом о высшем образовании
купить диплом Гознак
купить аттестат
купить диплом института
Желаю любому нужных оценок!
sSdfffobtix
Привет всем!
Были ли у вас случаи, когда приходилось писать дипломную работу в крайне ограниченные сроки? Это действительно требует большой ответственности и трудоемкости, но важно не отступать и продолжать активно участвовать в учебном процессе, как я.
Для тех, кто умеет эффективно находить и использовать информацию в сети, это действительно помогает в процессе согласования и написания дипломной работы. Больше не нужно тратить время на посещение библиотек или организацию встреч с научным руководителем. Здесь, на этом ресурсе, предоставлены надежные данные для заказа и написания дипломных и курсовых работ с гарантией качества и доставкой по всей России. Можете ознакомиться с предложениями тут , это проверенный источник!
http://avtobestnews.ru/poluchenie-uchebnyih-diplomov
купить диплом ссср
купить диплом специалиста
купить аттестат школы
купить диплом
купить диплом о среднем специальном
Желаю всем нужных отметок!
Enucbz
order glycomet online – glycomet 1000mg over the counter precose for sale online
Zfnzpg
glyburide 2.5mg for sale – buy dapagliflozin 10mg online cheap dapagliflozin order
sSdfffobtix
Приветики!
Бывало ли у вас такое, что приходилось писать дипломную работу в очень ограниченные сроки? Это действительно требует большой ответственности и тяжелого труда, но важно не сдаваться и продолжать активно заниматься учебными процессами, так же, как и я.
Для тех, кто умеет эффективно использовать интернет для поиска и анализа информации, это действительно облегчает процесс согласования и написания дипломной работы. Не нужно тратить время на посещение библиотек или организацию встреч с дипломным руководителем. Здесь представлены надежные данные для заказа и написания дипломных и курсовых работ с гарантией качества и доставкой по всей России. Можете ознакомиться с предложениями по ссылке , это проверенный способ!
https://againharry.rolka.me/viewtopic.php?id=1801#p8484
купить диплом университета
купить аттестат
купить диплом колледжа
купить диплом о среднем образовании
купить диплом ссср
Желаю каждому нужных оценок!
sSdfffobtix
Здравствуйте!
Бывало ли у вас такое, что приходилось писать дипломную работу в очень ограниченные сроки? Это действительно требует большой ответственности и тяжелого труда, но важно не сдаваться и продолжать активно заниматься учебными процессами, так же, как и я.
Для тех, кто умеет эффективно использовать интернет для поиска и анализа информации, это действительно облегчает процесс согласования и написания дипломной работы. Не нужно тратить время на посещение библиотек или организацию встреч с дипломным руководителем. Здесь представлены надежные данные для заказа и написания дипломных и курсовых работ с гарантией качества и доставкой по всей России. Можете ознакомиться с предложениями по ссылке , это проверенный способ!
https://moscow.bestbb.ru/post.php?fid=22
купить диплом Гознак
купить диплом института
купить диплом о среднем специальном
где купить диплом
купить диплом ссср
Желаю любому отличных отметок!
sSdfffobtix
Здравствуйте!
Бывало ли у вас такое, что приходилось писать дипломную работу в очень ограниченные сроки? Это действительно требует большой ответственности и тяжелого труда, но важно не сдаваться и продолжать активно заниматься учебными процессами, так же, как и я.
Для тех, кто умеет эффективно использовать интернет для поиска и анализа информации, это действительно облегчает процесс согласования и написания дипломной работы. Не нужно тратить время на посещение библиотек или организацию встреч с дипломным руководителем. Здесь представлены надежные данные для заказа и написания дипломных и курсовых работ с гарантией качества и доставкой по всей России. Можете ознакомиться с предложениями по ссылке , это проверенный способ!
http://msfo-soft.ru/msfo/forum/topic/add/forum24/
купить диплом института
купить диплом
купить аттестат
купить диплом техникума
купить диплом магистра
Желаю всем прекрасных оценок!
sSdfffobtix
Привет всем!
Бывало ли у вас такое, что приходилось писать дипломную работу в крайне сжатые сроки? Это действительно требует огромной ответственности и напряженных усилий, но важно не опускать руки и продолжать активно заниматься учебными процессами, как я.
Для тех, кто умеет быстро находить и анализировать информацию в сети, это действительно помогает в процессе согласования и написания дипломной работы. Больше не нужно тратить время на посещение библиотек или устраивать встречи с дипломным руководителем. Здесь, на этом ресурсе, предоставлены надежные данные для заказа и написания дипломных и курсовых работ с гарантией качества и доставкой по всей России. Можете ознакомиться с предложениями на сайте , это проверено!
https://prescriptionsfromnature.com/question/%d0%ba%d1%83%d0%bf%d0%b8%d1%82%d1%8c-%d0%b4%d0%b8%d0%bf%d0%bb%d0%be%d0%bc-%d0%b2-%d0%bc%d0%be%d1%81%d0%ba%d0%b2%d0%b5-%d0%bf%d0%be%d0%ba%d1%83%d0%bf%d0%ba%d0%b0-%d0%b4%d0%b8%d0%bf%d0%bb%d0%be%d0%bc/
купить диплом о высшем образовании
купить диплом колледжа
купить диплом специалиста
купить диплом магистра
купить диплом о среднем образовании
Желаю любому отличных отметок!
sSdfffobtix
Добрый день всем!
Бывало ли у вас такое, что приходилось писать дипломную работу в очень ограниченные сроки? Это действительно требует большой ответственности и тяжелого труда, но важно не сдаваться и продолжать активно заниматься учебными процессами, так же, как и я.
Для тех, кто умеет эффективно использовать интернет для поиска и анализа информации, это действительно облегчает процесс согласования и написания дипломной работы. Не нужно тратить время на посещение библиотек или организацию встреч с дипломным руководителем. Здесь представлены надежные данные для заказа и написания дипломных и курсовых работ с гарантией качества и доставкой по всей России. Можете ознакомиться с предложениями по ссылке , это проверенный способ!
https://ya.0bb.ru/viewtopic.php?id=10407#p28966
купить диплом техникума
купить диплом бакалавра
купить диплом колледжа
купить диплом института
купить диплом Гознак
Желаю любому нужных оценок!
sSdfffobtix
Добрый день всем!
Было ли у вас когда-нибудь такое, что приходилось писать дипломную работу в сжатые сроки? Это действительно требует огромной ответственности и напряженных усилий, но важно не сдаваться и продолжать активно заниматься учебными процессами, чем я и занимаюсь.
Для тех, кто умеет искать и анализировать информацию в интернете, это действительно помогает в процессе согласования и написания дипломной работы. Не нужно тратить время на посещение библиотек или организацию встреч с дипломным руководителем. Здесь представлены надежные данные для заказа и написания дипломных и курсовых работ с гарантией качества и доставкой по России. Можете ознакомиться с предложениями по ссылке , проверено!
https://nspcom.ru/2024/04/13/kupit-diplom-v-moskve-bytovye-sluchai-vynuzhdajut-k-pokupki-diploma/
купить диплом магистра
купить диплом в Москве
купить диплом Вуза
купить диплом специалиста
купить диплом бакалавра
Желаю каждому пятерошных) отметок!
sSdfffobtix
Привет всем!
Было ли у вас опыт написания дипломной работы в крайне сжатые сроки? Это действительно требует огромной ответственности и трудоемкости, однако важно сохранять упорство и продолжать активно участвовать в учебном процессе, как я это делаю.
Для тех, кто умеет эффективно искать и анализировать информацию в интернете, это действительно помогает в процессе согласования и написания дипломной работы. Больше не нужно тратить время на посещение библиотек или организацию встреч с научным руководителем. Здесь, на этом ресурсе, предоставлены надежные данные для заказа и написания дипломных и курсовых работ с гарантией качества и доставкой по всей России. Можете ознакомиться с предложениями по ссылке , это проверенный источник!
http://openmotonews.ru/kupit-uchebnyie-svidetelstva
купить диплом магистра
купить аттестат школы
купить диплом о среднем специальном
купить диплом Гознак
купить диплом о среднем образовании
Желаю каждому нужных отметок!
sSdfffobtix
Приветики!
Бывало ли у вас такое, что приходилось писать дипломную работу в крайне сжатые сроки? Это действительно требует огромной ответственности и напряженных усилий, но важно не опускать руки и продолжать активно заниматься учебными процессами, как я.
Для тех, кто умеет быстро находить и анализировать информацию в сети, это действительно помогает в процессе согласования и написания дипломной работы. Больше не нужно тратить время на посещение библиотек или устраивать встречи с дипломным руководителем. Здесь, на этом ресурсе, предоставлены надежные данные для заказа и написания дипломных и курсовых работ с гарантией качества и доставкой по всей России. Можете ознакомиться с предложениями на сайте , это проверено!
https://mediamemorial.ru/club/user/125807/forum/message/3104/12586/#message12586
купить диплом о среднем образовании
купить диплом нового образца
купить диплом
купить диплом Гознак
купить диплом о среднем специальном
Желаю любому пятерошных) оценок!
GichardCrorp
Приветики!
купить диплом цена
Желаю всем положительных отметок!
http://www.birulevo.su/component/option,com_smf/Itemid,34/action,profile/u,4065/sa,showPosts/
купить диплом института
купить диплом техникума
купить диплом университета
Earnestjem
Привет всем!
купить диплом специалиста
Желаю каждому отличных оценок!
http://skaters.ru/forum/viewtopic.php?f=10&t=37557
купить диплом о среднем специальном
купить диплом специалиста
где купить диплом
SLewisNem
Привет, дорогой читатель!
купить диплом института
Желаю любому отличных оценок!
http://ftp.video-foto.by/forum/viewtopic.php?f=81&t=27595&p=196665
купить диплом о среднем образовании
купить диплом колледжа
купить диплом Гознак
SShanedah
Добрый день всем!
купить диплом
Желаю любому нужных отметок!
https://tostadofoods.com/%D0%BA%D1%83%D0%BF%D0%B8%D1%82%D1%8C-%D0%B4%D0%B8%D0%BF%D0%BB%D0%BE%D0%BC-%D0%BE-%D0%B2%D1%8B%D1%81%D1%88%D0%B5%D0%BC-%D0%BE%D0%B1%D1%80%D0%B0%D0%B7%D0%BE%D0%B2%D0%B0%D0%BD%D0%B8%D0%B8-%D0%BA%D1%83/
купить диплом университета
купить диплом техникума
купить диплом о среднем образовании
Ismaelagopy
What’s up to all, because I am in fact keen of reading this web site’s post to be updated on a regular basis. It carries fastidious data.
#be#jk3#jk#jk#JK##
купить американский номер для смс
SLhanedah
Привет, дорогой читатель!
купить диплом о высшем образовании
Желаю любому отличных оценок!
http://ftp.video-foto.by/forum/viewtopic.php?f=82&t=27596
купить аттестат
купить диплом в Москве
купить аттестат школы
LarryHerce
PBN sites
We’ll establish a web of PBN sites!
Pros of our PBN network:
We carry out everything so google DOES NOT grasp THAT this is A PBN network!!!
1- We obtain domains from separate registrars
2- The principal site is hosted on a VPS hosting (Virtual Private Server is high-speed hosting)
3- The remaining sites are on distinct hostings
4- We assign a distinct Google ID to each site with confirmation in Google Search Console.
5- We make websites on WordPress, we don’t use plugins with aided by which Trojans penetrate and through which pages on your websites are generated.
6- We don’t repeat templates and utilize only exclusive text and pictures
We do not work with website design; the client, if wished, can then edit the websites to suit his wishes
ScottpaG
Understanding COSC Certification and Its Importance in Watchmaking
COSC Validation and its Demanding Standards
Controle Officiel Suisse des Chronometres, or the Official Swiss Chronometer Testing Agency, is the authorized Swiss testing agency that attests to the accuracy and precision of wristwatches. COSC certification is a sign of excellent craftsmanship and dependability in timekeeping. Not all timepiece brands follow COSC accreditation, such as Hublot, which instead adheres to its proprietary stringent criteria with mechanisms like the UNICO, achieving comparable accuracy.
The Art of Exact Chronometry
The core mechanism of a mechanized watch involves the spring, which supplies energy as it loosens. This system, however, can be susceptible to external factors that may affect its accuracy. COSC-validated mechanisms undergo rigorous testing—over fifteen days in various conditions (5 positions, 3 temperatures)—to ensure their durability and reliability. The tests evaluate:
Typical daily rate precision between -4 and +6 secs.
Mean variation, peak variation rates, and impacts of thermal changes.
Why COSC Accreditation Is Important
For watch fans and connoisseurs, a COSC-validated timepiece isn’t just a piece of technology but a proof to enduring quality and accuracy. It signifies a watch that:
Presents excellent reliability and accuracy.
Provides guarantee of quality across the entire design of the timepiece.
Is likely to maintain its worth more effectively, making it a wise choice.
Famous Chronometer Manufacturers
Several well-known brands prioritize COSC certification for their timepieces, including Rolex, Omega, Breitling, and Longines, among others. Longines, for instance, offers collections like the Archive and Spirit, which showcase COSC-accredited mechanisms equipped with innovative materials like silicone balance suspensions to enhance durability and efficiency.
Historic Background and the Development of Chronometers
The notion of the timepiece dates back to the requirement for precise timekeeping for navigation at sea, highlighted by John Harrison’s work in the 18th cent. Since the formal establishment of COSC in 1973, the certification has become a benchmark for judging the precision of high-end timepieces, continuing a legacy of excellence in horology.
Conclusion
Owning a COSC-certified timepiece is more than an aesthetic choice; it’s a dedication to quality and accuracy. For those valuing accuracy above all, the COSC certification offers tranquility of thoughts, guaranteeing that each validated timepiece will operate reliably under various circumstances. Whether for individual contentment or as an investment decision, COSC-certified timepieces distinguish themselves in the world of watchmaking, bearing on a legacy of meticulous timekeeping.
ScottpaG
casibom güncel
Nihai Zamanın En Büyük Gözde Kumarhane Sitesi: Casibom
Casino oyunlarını sevenlerin artık duymuş olduğu Casibom, en son dönemde adından genellikle söz ettiren bir iddia ve oyun web sitesi haline geldi. Ülkemizdeki en başarılı bahis web sitelerinden biri olarak tanınan Casibom’un haftalık olarak cinsinden değişen açılış adresi, alanında oldukça yenilikçi olmasına rağmen emin ve kar getiren bir platform olarak tanınıyor.
Casibom, muadillerini geride bırakarak köklü bahis platformların geride bırakmayı başarıyor. Bu pazarda eski olmak önemli olsa da, katılımcılarla iletişim kurmak ve onlara ulaşmak da aynı derecede değerli. Bu noktada, Casibom’un her saat yardım veren canlı destek ekibi ile kolayca iletişime ulaşılabilir olması büyük önem taşıyan bir avantaj sunuyor.
Hızla büyüyen oyuncuların kitlesi ile dikkat çekici Casibom’un arkasındaki başarım faktörleri arasında, yalnızca casino ve gerçek zamanlı casino oyunlarına sınırlı olmayan geniş bir hizmetler yelpazesi bulunuyor. Spor bahislerinde sunduğu geniş alternatifler ve yüksek oranlar, oyuncuları çekmeyi başarıyor.
Ayrıca, hem spor bahisleri hem de kumarhane oyunları katılımcılara yönlendirilen sunulan yüksek yüzdeli avantajlı bonuslar da ilgi çekici. Bu nedenle, Casibom hızla alanında iyi bir pazarlama başarısı elde ediyor ve büyük bir oyuncu kitlesi kazanıyor.
Casibom’un kar getiren promosyonları ve tanınırlığı ile birlikte, platforma üyelik hangi yollarla sağlanır sorusuna da bahsetmek gerekir. Casibom’a mobil cihazlarınızdan, bilgisayarlarınızdan veya tabletlerinizden web tarayıcı üzerinden rahatça erişilebilir. Ayrıca, sitenin mobil cihazlarla uyumlu olması da büyük bir fayda getiriyor, çünkü şimdi hemen hemen herkesin bir akıllı telefonu var ve bu cihazlar üzerinden kolayca giriş sağlanabiliyor.
Hareketli cep telefonlarınızla bile yolda canlı olarak bahisler alabilir ve yarışmaları gerçek zamanlı olarak izleyebilirsiniz. Ayrıca, Casibom’un mobil cihazlarla uyumlu olması, memleketimizde casino ve casino gibi yerlerin meşru olarak kapatılmasıyla birlikte bu tür platformlara girişin büyük bir yolunu oluşturuyor.
Casibom’un itimat edilir bir casino sitesi olması da önemlidir bir artı sağlıyor. Ruhsatlı bir platform olan Casibom, kesintisiz bir şekilde keyif ve kazanç elde etme imkanı getirir.
Casibom’a kullanıcı olmak da son derece rahatlatıcıdır. Herhangi bir belge koşulu olmadan ve ücret ödemeden siteye kolaylıkla üye olabilirsiniz. Ayrıca, web sitesi üzerinde para yatırma ve çekme işlemleri için de birçok farklı yöntem vardır ve herhangi bir kesim ücreti talep edilmemektedir.
Ancak, Casibom’un güncel giriş adresini izlemek de elzemdir. Çünkü gerçek zamanlı iddia ve kumarhane web siteleri popüler olduğu için hileli platformlar ve dolandırıcılar da görünmektedir. Bu nedenle, Casibom’un sosyal medya hesaplarını ve güncel giriş adresini düzenli olarak kontrol etmek elzemdir.
Sonuç, Casibom hem itimat edilir hem de kazanç sağlayan bir kumarhane platformu olarak ilgi çekici. yüksek promosyonları, kapsamlı oyun seçenekleri ve kullanıcı dostu mobil uygulaması ile Casibom, casino hayranları için ideal bir platform getiriyor.
Fobertvence
В нашем обществе, где диплом является началом отличной карьеры в любой сфере, многие стараются найти максимально быстрый путь получения образования. Важность наличия документа об образовании переоценить невозможно. Ведь диплом открывает двери перед всеми, кто стремится вступить в профессиональное сообщество или учиться в каком-либо ВУЗе.
Наша компания предлагает оперативно получить этот важный документ. Вы сможете приобрести диплом, и это становится выгодным решением для человека, который не смог завершить обучение, утратил документ или желает исправить плохие оценки. дипломы производятся с особой тщательностью, вниманием ко всем деталям, чтобы в результате получился документ, полностью соответствующий оригиналу.
Превосходство такого решения заключается не только в том, что вы сможете оперативно получить свой диплом. Процесс организовывается удобно и легко, с профессиональной поддержкой. От выбора подходящего образца до точного заполнения личных данных и доставки по стране — все под полным контролем квалифицированных мастеров.
Таким образом, для всех, кто пытается найти максимально быстрый способ получить необходимый документ, наша компания предлагает отличное решение. Заказать диплом – значит избежать долгого процесса обучения и сразу перейти к личным целям, будь то поступление в ВУЗ или начало карьеры.
https://diploman-russiyan.com
Chloe Love
Very much I love to spend time with good people. Do not let me free adult webcams
TimsothyTet
В наше время, когда диплом является началом отличной карьеры в любой сфере, многие стараются найти максимально быстрый путь получения образования. Наличие официального документа трудно переоценить. Ведь диплом открывает двери перед каждым человеком, который хочет начать профессиональную деятельность или учиться в ВУЗе.
Предлагаем очень быстро получить этот важный документ. Вы можете купить диплом нового или старого образца, и это является выгодным решением для человека, который не смог закончить обучение или потерял документ. дипломы производятся аккуратно, с особым вниманием к мельчайшим нюансам. В итоге вы получите продукт, максимально соответствующий оригиналу.
Преимущество такого подхода состоит не только в том, что можно максимально быстро получить свой диплом. Весь процесс организовывается удобно и легко, с профессиональной поддержкой. Начиная от выбора нужного образца до грамотного заполнения личной информации и доставки по России — все под полным контролем наших специалистов.
Для всех, кто хочет найти быстрый и простой способ получения требуемого документа, наша компания может предложить выгодное решение. Заказать диплом – значит избежать долгого процесса обучения и не теряя времени перейти к достижению своих целей: к поступлению в ВУЗ или к началу успешной карьеры.
https://diploman-russiyan.com
ScottpaG
레버리지스탁
로드스탁과의 레버리지 스탁: 투자 전략의 신규 영역
로드스탁을 통해 제공하는 레버리지 방식의 스탁은 주식 시장의 투자법의 한 방법으로, 높은 이익율을 목적으로 하는 투자자들에게 매혹적인 옵션입니다. 레버리지를 사용하는 이 방법은 투자자가 자신의 자본을 초과하는 투자금을 투자할 수 있도록 하여, 주식 장에서 더 큰 힘을 행사할 수 있는 기회를 제공합니다.
레버리지 스탁의 원리
레버리지 방식의 스탁은 일반적으로 자본을 빌려 운용하는 방법입니다. 예를 들어, 100만 원의 자금으로 1,000만 원 상당의 증권을 구매할 수 있는데, 이는 투자자들이 기본 자본보다 훨씬 더 많은 주식을 구매하여, 증권 가격이 상승할 경우 관련된 훨씬 더 큰 수익을 가져올 수 있게 합니다. 그러나, 증권 값이 떨어질 경우에는 그 손해 또한 커질 수 있으므로, 레버리지 사용을 사용할 때는 조심해야 합니다.
투자 전략과 레버리지
레버리지는 특히 성장 잠재력이 상당한 회사에 투입할 때 유용합니다. 이러한 회사에 큰 비율을 통해 적용하면, 성공할 경우 큰 수입을 얻을 수 있지만, 반대 경우의 경우 큰 위험도 감수하게 됩니다. 그렇기 때문에, 투자자들은 자신의 리스크 관리 능력과 상장 분석을 통해, 어떤 회사에 얼마만큼의 자본을 투자할지 결정해야 합니다.
레버리지 사용의 이점과 위험성
레버리지 방식의 스탁은 높은 수익을 제공하지만, 그만큼 높은 위험성 수반합니다. 증권 시장의 변동성은 예측이 힘들기 때문에, 레버리지를 이용할 때는 늘 장터 동향을 면밀히 주시하고, 손실을 최소화할 수 있는 전략을 마련해야 합니다.
최종적으로: 신중한 고르기가 요구됩니다
로드스탁에서 제공된 레버리지 스탁은 효과적인 투자 도구이며, 적당히 활용하면 상당한 수입을 벌어들일 수 있습니다. 그러나 높은 리스크도 신경 써야 하며, 투자 선택은 필요한 정보와 세심한 판단 후에 이루어져야 합니다. 투자자 본인의 재정 상황, 리스크 감수 능력, 그리고 장터 상황을 고려한 균형 잡힌 투자 전략이 중요합니다.